【產(chǎn)品名稱】新型冠狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒

【包裝規(guī)格】50T/盒

【使用范圍】該試劑盒用于使用咽拭子，鼻咽拭子，肺泡灌洗液，痰液樣品定性檢測(cè)新型冠狀病毒（2019-nCoV）。該試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)病情進(jìn)行全面分析。

【測(cè)試原理】該試劑盒基于一步式RT-PCR技術(shù)。選擇2019年新型冠狀病毒（2019-nCoV）ORF1ab和N基因作為擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域。設(shè)計(jì)了特異性引物和熒光探針（N基因探針用FAM標(biāo)記，ORF1ab探針用HEX標(biāo)記），用于檢測(cè)樣品中的2019年新型冠狀病毒RNA。該試劑盒還包括一個(gè)內(nèi)源性內(nèi)部控制檢測(cè)系統(tǒng)（內(nèi)部控制基因探針標(biāo)記有CY5），用于監(jiān)測(cè)樣本收集，RNA和PCR擴(kuò)增的過(guò)程，從而減少假陰性結(jié)果。

【主要成分】

自備試劑：RNA提取或純化試劑。

陰性/陽(yáng)性對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照是包含靶標(biāo)片段的RNA，陰性對(duì)照是無(wú)核酸水。在使用過(guò)程中，它們應(yīng)參與提取，并應(yīng)被視為傳染性物質(zhì)。它們應(yīng)按照有關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理和處置。

內(nèi)參基因?yàn)槿?/span>RnaseP基因。

【保存條件和有效期】-20±5℃，有效期6個(gè)月，反復(fù)凍融次數(shù)不應(yīng)超過(guò)5次。

【適用儀器】擁有FAM/HEX/CY5等多通道熒光PCR儀。

【標(biāo)本要求】

1.適用的樣本類型：鼻/咽拭子、痰、肺泡灌洗液。

2.標(biāo)本采集（無(wú)菌技術(shù)）

咽拭子：同時(shí)用兩根拭子擦拭扁桃體和咽后壁，然后將拭子頭浸入裝有采樣液的試管中；

痰：患者深咳后，將咳嗽的痰收集在裝有采樣液的螺帽試管中；

肺泡灌洗液：由專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行采集。

3.樣品的儲(chǔ)存和運(yùn)輸

用于病毒分離和RNA檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行測(cè)試。24小時(shí)內(nèi)可檢測(cè)到的標(biāo)本可在4℃下保存；那些在24小時(shí)內(nèi)無(wú)法檢測(cè)到的物品應(yīng)存放在-70℃或以下（如果沒(méi)有-70℃的存放條件，則應(yīng)暫時(shí)存放在-20℃冰箱中）。標(biāo)本應(yīng)避免在運(yùn)輸過(guò)程中反復(fù)凍結(jié)和解凍。標(biāo)本應(yīng)在收集后盡快送到實(shí)驗(yàn)室。如果樣品需要長(zhǎng)距離運(yùn)輸，建議使用干冰進(jìn)行存儲(chǔ)。

【測(cè)試方法】

1  樣本處理和RNA提?。颖咎幚韰^(qū)）

建議取200μl液體樣品進(jìn)行RNA提取，相關(guān)提取步驟參照商品化RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。該試劑盒中的陰性和陰性對(duì)照均參與提取。

2  PCR試劑制備（試劑制備區(qū)）

2.1  從試劑盒中取出所有組份在室溫解凍后，搖動(dòng)并混合。使用前以8,000 rpm離心幾秒鐘；計(jì)算試劑所需量，反應(yīng)體系配制見(jiàn)下表：

2.2  徹底混合各組分后，短時(shí)間離心以使管壁上的所有液體落到管底部，然后將20 μl擴(kuò)增系統(tǒng)等分到PCR管中

3  采樣（標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)）

分別添加5μl提取后陰、陽(yáng)性對(duì)照，待測(cè)標(biāo)本的RNA到PCR反應(yīng)管中，蓋緊管，并在8,000 rpm離心數(shù)秒后，將其轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)域。

4  PCR擴(kuò)增（擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)）

4.1將反應(yīng)管放入儀器的樣品池中，參數(shù)設(shè)定如下：

5  結(jié)果分析（請(qǐng)參考各儀器的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置）

反應(yīng)后，保存結(jié)果。分析后根據(jù)圖像調(diào)整基準(zhǔn)線的起始值，終止值和閾值（用戶可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整，起始值可以設(shè)置為3?15，終止值可以設(shè)置為5?20，調(diào)整）在對(duì)數(shù)圖窗口的閾值處，使閾值線處于對(duì)數(shù)階段，陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線為直線或低于閾值線）。

6  質(zhì)量控制

陰性對(duì)照：FAM、HEX、CY5檢測(cè)通道沒(méi)有明顯的擴(kuò)增曲線;

nCOV陽(yáng)性對(duì)照：FAM和HEX檢測(cè)通道的明顯擴(kuò)增曲線，Ct值≤32；

在同一實(shí)驗(yàn)中必須同時(shí)滿足以上要求；否則，該實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需要再次進(jìn)行。

7  結(jié)果的確定

7.1  若測(cè)試樣品的FAM和HEX通道中沒(méi)有擴(kuò)增曲線或Ct值> 40，CY5通道中存在擴(kuò)增曲線，則可以判斷樣品中沒(méi)有新型冠狀病毒（2019-nCoV）RNA；

7.2   若測(cè)試樣品為人真實(shí)樣本且FAM、HEX和CY5通道中均沒(méi)有擴(kuò)增曲線或Ct值> 40，則可以判斷此次實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需重新測(cè)試；

7.3   若測(cè)試樣品在FAM和HEX通道中具有明顯的擴(kuò)增曲線，且Ct值≤40，則可以判斷該樣品對(duì)新型冠狀病毒（2019-nCoV）呈陽(yáng)性。

7.4  若測(cè)試樣品僅在FAM或HEX的一個(gè)通道中具有明顯的擴(kuò)增曲線，且Ct值≤40，而另一個(gè)通道中沒(méi)有擴(kuò)增曲線，則需要重新測(cè)試結(jié)果。如果重新測(cè)試結(jié)果一致，則可以判斷該樣品對(duì)新型冠狀病毒（2019-nCoV）呈陽(yáng)性。如果重新測(cè)試結(jié)果是否定的，則可以判斷該樣品對(duì)新型冠狀病毒（2019-nCoV）呈陰性。

【測(cè)試結(jié)果的解釋】

1.每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)測(cè)試陰性和陽(yáng)性對(duì)照。只有當(dāng)對(duì)照滿足質(zhì)量控制要求時(shí)，才能確定測(cè)試結(jié)果

2.當(dāng)FAM和HEX檢測(cè)通道為正時(shí)，由于系統(tǒng)競(jìng)爭(zhēng)，來(lái)自CY5通道（內(nèi)部控制通道）的結(jié)果可能為負(fù)。

3.當(dāng)內(nèi)部控制結(jié)果為負(fù)時(shí)，如果試管的FAM和HEX檢測(cè)通道也為負(fù)，則表明系統(tǒng)被禁止或操作錯(cuò)誤，則測(cè)試無(wú)效。因此，樣品需要重新測(cè)試。

【測(cè)試方法的局限性】

1.樣品測(cè)試結(jié)果與樣品采集，處理，運(yùn)輸和存儲(chǔ)的質(zhì)量有關(guān)。不合理的樣品采集，轉(zhuǎn)移，存儲(chǔ)和處理可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的測(cè)試結(jié)果。

2.樣品處理過(guò)程中交叉污染控制不佳，可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

3.在流行期間，病毒的基因突變也可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

4.此試劑盒的測(cè)試結(jié)果僅供臨床參考。應(yīng)結(jié)合患者的癥狀/體征，病史，其他實(shí)驗(yàn)室檢查和治療反應(yīng)來(lái)考慮患者的臨床診斷和治療。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

產(chǎn)品分析性能評(píng)估結(jié)果：

1  該試劑盒的分析靈敏度為103拷貝/ ml。

2.交叉反應(yīng)：不與其他病原體發(fā)生交叉反應(yīng)，例如地方性人類冠狀病毒（HKU1，OC43，NL63和229E）、H1N1（新型甲型H1N1流感病毒（2009）、季節(jié)性H1N1流感病毒、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、人類基因組DNA與2019年新型冠狀病毒相似或引起類似癥狀。

3.外源性干擾物質(zhì)：標(biāo)本中針對(duì)患者可能使用的治療藥物，如粘蛋白，苯福林、羥甲唑啉、氯化鈉（含防腐劑）、倍氯美松、地塞米松、曲安奈德、布地奈德、莫米松、氟替卡松、α-干擾素、扎那米韋、利巴韋林、奧司他韋、阿奇霉素、頭孢曲松、左氧氟沙星、妥布霉素均不會(huì)干擾試劑盒的測(cè)試結(jié)果。

4.痰和咽拭子標(biāo)本中可能存在的內(nèi)源性物質(zhì)，例如全血和粘液，不會(huì)影響試劑盒的測(cè)試結(jié)果。

5.精度：批內(nèi)/批間精度，日內(nèi)/日常精度，不同操作者之間的精度變異系數(shù)（CV）不大于5％。

6.陰性/陽(yáng)性參照物的符合率：3種陽(yáng)性參照物和10種陰性參照物的符合率均為100％。

7.將臨床評(píng)價(jià)結(jié)果與通過(guò)新型冠狀病毒感染的肺炎患者診治方案和通過(guò)新型冠狀病毒感染的肺炎患者監(jiān)測(cè)方案（第二版）中通過(guò)推薦方法獲得的確認(rèn)/排除結(jié)果進(jìn)行比較。分析了解放軍總醫(yī)院海南醫(yī)院，廣東省疾病預(yù)防控制中心等8家醫(yī)療機(jī)構(gòu)的實(shí)際使用情況。通過(guò)初步分析，基本確定了該產(chǎn)品的臨床性能可以滿足流行情況的緊急需求。用于臨床評(píng)估的樣品類型包括咽拭子和痰液。產(chǎn)品上市后將收集更多臨床數(shù)據(jù)，以確認(rèn)其臨床性能。

【注意事項(xiàng)】

1  本產(chǎn)品僅用于體外測(cè)試。實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明。

2  為了避免樣本中任何潛在的生物危害，應(yīng)將樣本視為具有傳染性，并避免與人體皮膚和粘膜接觸；標(biāo)本應(yīng)在生物安全柜中處理，以防止氣溶膠流出。樣品制備區(qū)域中使用的試管和尖端應(yīng)倒入盛有消毒劑的容器中，并與醫(yī)療廢物一起消毒后再丟棄。樣品處理和加工必須符合當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)規(guī)定。

3  產(chǎn)品加工：PCR后，該產(chǎn)品很可能造成污染。所有的反應(yīng)管應(yīng)由當(dāng)天不再參與實(shí)驗(yàn)的人員放入生物安全垃圾處理袋或其他容器中，然后在完全密封后丟棄。

4  在整個(gè)過(guò)程中避免RNase污染。實(shí)驗(yàn)期間，請(qǐng)穿著工作服，一次性手套和口罩。在通風(fēng)良好的化學(xué)通風(fēng)櫥或生物安全柜中完成操作，該柜要用紫外線清潔，消毒和滅菌，以防止任何有害物質(zhì)進(jìn)入呼吸道。

5  使用高壓滅菌的一次性離心管和吸頭，或購(gòu)買無(wú)DNase和RNase的離心管和吸頭。

6  使用前要完全解凍PCR檢測(cè)試劑，并在8000 rpm離心幾秒鐘后使用，但要避免反復(fù)凍融。

7  如果在樣品處理過(guò)程中不能很好地控制交叉污染，則可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

8  實(shí)驗(yàn)室管理應(yīng)嚴(yán)格按照PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室人員必須接受專業(yè)培訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格劃分為不同區(qū)域（試劑制備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)，擴(kuò)增試驗(yàn)區(qū)）。所有消耗品均應(yīng)消毒一次使用。實(shí)驗(yàn)的每個(gè)階段均應(yīng)使用專用儀器和設(shè)備。每個(gè)階段的每個(gè)區(qū)域的用品都不得交叉使用。

9  實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)使用10％的次氯酸鹽或75％的酒精對(duì)工作臺(tái)和移液器進(jìn)行消毒，然后將其置于紫外線下20-30分鐘。

10   RNA樣品提取完成后，建議立即進(jìn)行下一個(gè)實(shí)驗(yàn)。否則，請(qǐng)將提取物儲(chǔ)存在-20℃以便使用（24小時(shí)內(nèi)）；

11  必須對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)量控制。

12  各種因素可能會(huì)導(dǎo)致試劑在存儲(chǔ)，運(yùn)輸和使用過(guò)程中性能發(fā)生變化，例如不正確的存儲(chǔ)和運(yùn)輸，非標(biāo)準(zhǔn)樣品采集，樣品處理和測(cè)試。請(qǐng)嚴(yán)格遵守說(shuō)明。由于樣品采集過(guò)程的特征（例如，用棉簽采樣和病毒感染過(guò)程本身），可能由于采集的樣品不足而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。因此，應(yīng)結(jié)合其他臨床診斷和治療信息對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行重新檢測(cè)。